`:top

Als `!Random priming`! (oder auch `!random-primed oligo-labeling`!) wird in der `F33f`_`[Molekularbiologie`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Molekularbiologie]`_`f eine Technik zur `F33f`_`[Markierung`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Molekülmarkierung]`_`f von `F33f`_`[DNA`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Desoxyribonukleinsäure]`_`f bezeichnet. Dabei synthetisiert man an `F33f`_`[denaturierte`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Denaturierung_(Biochemie)]`_`f (einzelsträngige) DNA mit Hilfe von kurzen `F33f`_`[Primern`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Primer]`_`f als Startpunkt einen markierten Gegenstrang.

Die Methode beruht auf den Arbeiten von Andrew P. Feinberg und `F33f`_`[Bert Vogelstein`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Bert_Vogelstein]`_`f von der `F33f`_`[Johns Hopkins University`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Johns_Hopkins_University]`_`f. Mit über 21.000 im `F33f`_`[Web of Science`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Web_of_Science]`_`f annotierten Zitierungen gehört sie zu den meistzitierten Arbeiten in der Molekularbiologie.

Zu Beginn wird die zu markierende DNA nach Zugabe eines Gemisches aus `F33f`_`[Oligonukleotiden`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Oligonukleotid]`_`f, meist Hexaoligonukleotide mit zufälliger Sequenz, bei 95 °C denaturiert. Während des Abkühlens auf Raumtemperatur lagern sich passende Oligonukleotide an komplementäre Sequenzabschnitte der DNA an (`*annealing`*). Das als `F33f`_`[Klenow-Fragment`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Klenow-Fragment]`_`f bezeichnete Fragment der `F33f`_`[DNA-Polymerase I`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=DNA-Polymerase]`_`f aus `F33f`_`[E. coli`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Escherichia_coli]`_`f nutzt diese Primer, um den Gegenstrang bei 37 °C mit Hilfe markierter Nukleotide zu synthetisieren. Man benutzt das Klenow-Fragment, da dieses zwar von 5' nach 3' synthetisieren (`F33f`_`[Polymerase`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Polymerase]`_`f-Aktivität) und von 3' nach 5' Nukleotide herausschneiden kann (`F33f`_`[Exonuklease`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Exonuklease]`_`f-Aktivität), jedoch nicht von 5' nach 3' schneidet. Das Klenow-Fragment fällt durchschnittlich nach 500 bis 2000 Basen von der Vorlage ab.

Die Markierung der DNA erfolgt wie bei der `F33f`_`[Nick translation`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Nick_translation]`_`f dadurch, dass `F33f`_`[radioaktiv`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Radioaktivität]`_`f markierte (z. B. [α-32P]`F33f`_`[dATP`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Desoxyadenosintriphosphat]`_`f) oder mit einem Markierungs-Molekül (`F33f`_`[Digoxygenin`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Digoxygenin]`_`f, `F33f`_`[Biotin`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Biotin]`_`f, `F33f`_`[Fluoreszenzfarbstoff`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Fluoreszenzfarbstoff]`_`f) verknüpfte `F33f`_`[Nukleotide`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Nukleotide]`_`f eingesetzt werden. Durch die nur kurzen zu synthetisierenden Stränge ist dieses System sehr einfach und schnell. Vor der Anwendung werden die DNA-Moleküle, z. B. durch Größenausschluss-Chromatographie, von den nicht eingebauten Nukleotiden abgetrennt.

>>Contents

• `F0af`_`[Literatur`#literatur]`_`f

• `F0af`_`[Siehe auch`#siehe-auch]`_`f

-─

>>Literatur

• A. P. Feinberg & `F33f`_`[B. Vogelstein`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Bert_Vogelstein]`_`f (1983): `*A technique for radiolabeling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity.`* In: `*`F33f`_`[Anal. Biochem.`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Anal._Biochem.]`_`f`* Bd. 132, S. 6–13. PMID 6312838

>>Siehe auch

• `F33f`_`[Nick translation`:/page/entry.mu`zim=wikipedia_de_all_nopic_2026-01.zim|entry_path=Nick_translation]`_`f

`c`F0af`_`[↑ Back to top`#top]`_`f`a